PHOX2B
paired-like homeobox 2b
NBPhox, Neuroblastoma Phox, Paired-like homeobox 2B, Paired mesoderm homeobox protein 2B, Phox2b, PHOX2B homeodomain protein, PMX2B
Homo sapiens
Previsione attività anno 2009
Attività da svolgere:
Recettori accoppiati a Gproteine. Nel 2009 intendiamo proseguire lo screening di composti selettivi attivi sui recettori dell' ossitocina e vasopressina mediante assays di BRET per le G-proteine di tipo Galphai2, Galphai3 e per la proteina beta-arrestina. Questi composti verranno anche impiegati in modelli animali di malattie neuropsichiatriche, come l'autismo, in cui è stata ipotizzato un coinvolgimento di questi recettori e su modelli cellulari per studiare la loro efficacia nel controllo della proliferazione. Infine, verrrano sintetizzati ligandi fluorescenti per lo studio del traffico di questi recettori in vivo. Studi sul Sistema nervoso autonomico. Continueremo l'identificazione dei principali geni target di PHOX2B, in vivo ed in vitro, con metodologie di biologia molecolare e cellulare in modo da comprendere meglio il ruolo di questi fattori nel differenziamento delle cellule del sistema utonomo periferico. Avendo accertato lo scorso anno la presnza di alcune mutazioni di PHOX2B, tipo espansione di alanine, nella Sindrome di Ipoventilazione Centrale Congenita, ne studieremo quest'anno gli effetti sulle proprietà trascrizionali di PHOX2B e cercheremo quindi di collegare questi effetti con le alterazioni presenti in vivo nei pazienti affetti da questa sindrome congenita. Infine cercheremo di portare a termine la ricerca sul ruolo di alcuni sottotipi di recettori nicotinici nell'infiammazione per chiarire se veramente l'ipotesi nicotinica abbia una rilevanza nello stabilirsi e nel mantenersi dei fenomeni infiammatori. Studi sul cervelletto. Al fine di rivelare le conseguenze dell'attivazione del calcio intracellulare negli astrociti da parte del CGRP, nel corso del 2009 verrà affrontata l'analisi della possibile modulazione, da parte di questo peptide, della produzione di citochine e di altri fattori solubili rilasciati. Inoltre verrà analizzata l'espressione (e la relativa regolazione) di RCP (un componente del recettore del CGRP) in queste stesse cellule. Infine, verrà completata l'analisi dell'espressione di USP8/mUBPy (un enzima deubiquitinante) nel sistema nervoso centrale. Con tecniche di doppia immunofluoresceza ed analisi confocale, era stato possibile dimostrare come le terminazioni muscoidi positive per il neuropeptide contattino le cellule dei granuli della parte inferiore dell'EGL, nel corso della loro fase transiente di migrazione tangenziale, tra PD2 PD8. Non è stato tuttavia possibile dimostrare, con certezza la presenza di contatti sinaptici tra le terminazioni neuropeptide positive e somi/dendriti delle cellule dei granuli. Nel 2009 proseguirà questa analisi con tecniche di postembedding e doppia marcatura
Punti critici e azioni da svolgere:
Per il problema dei fondi e del personale di ricerca cercheremo di aumentare i finanziamenti a disposizione attraverso le domande ad altre agenzie di finanziamento. Anche se le domande andassero a buon fne non si risolverà però il problema dell'acquisto di nuovi strumenti in quando difficilmente le nuove attrezzature sono finanziate dai grant. Per i punti critici riguardanti lo svolgimento della ricerca stiamo sempre pperfezionando gli approcci metodologici anche attraverso le collaborazioni con ricercatori esterni di laboratori qualificati.
Risultati attesi nell'anno:
Ricerche sui recettori accopiati a G proteine. Identificazione di ligandi selettivi per le diverse vie di signalling recettoriale da impiegare per il possibile trattamento sintomatico di malattie neurospichiatriche, come l'autismo, in cui è stata ipotizzato un coinvolgimento dei recettori per i peptidi neuroipofisari ossitocina e vasopressina. Studio del traffico del recettore dell'ossitocina in vivo mediante ligandi fluorescenti. Ulteriore sviluppo di metodi fisici per lo studio delle interazioni Ligando-Recettore e per l'analisi funzionale delle vie di trasduzione dei messaggi rececettoriali. Ricerche sui fattori responsabili del differenziamento del Sistema nervoso autonomico. Identificazione dei principali geni target di PHOX2B Effetti di mutazioni, tipo espansione di alanine di PHOX2B, osservate nella Sindrome di Ipoventilazione Centrale Congenita sulle proprietà trascrizionali di PHOX2B Ruolo di alcuni sottotipi di recettori nicotinici nell'infiammazione. Ricerche sul differenziamento del Cervelletto. Ci si attende di poter identificare gli effettori finali dell'attivazione prodotta sugli astrociti da parte del neuropeptide CGRP, fattori potenzialmente implicati sia nello sviluppo della corteccia cerebellare, sia in condizioni di patologie di tipo neuroinfiammatorio nel sistema nervoso centrale. Inoltre, ci si attende di poter identificare i meccanismi di regolazione dell'espressione di RCP negli astrociti. Ancorchè l'azione dell'elemento pre-sinaptico possa esercitarsi sulla cellula target anche attraverso fattori diffusibili, cercheremo di stabilire se la presenza di contatti sinaptici tra le fibre muscoidi e le cellule dei granuli nell'EGL partecipi attivamente alla selezione specifica del target, nell'ambito del processo della formazione delle connessioni fibre muscoidi-cellule dei granuli.
Iniziative per l'acquisizione di ulteriori entrate:
Presenteremo domande a Telethon 2009 e PRIN per le ricerche sul differenziamento del sistema autonomo, AIRC, PRIN e Fondazione CARIPLO per le ricerche sui Recettori accoppiati a G proteine,FISM per le ricerche sul cervelletto.
Siamo solo sassolini buttati nel mare che fanno increspare l’acqua.
